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膠原酶產(chǎn)品信息

資料來(lái)源：溶組織梭菌

IUB：3.4.24.3

膠原酶原料認(rèn)證 

粗膠原酶制劑含有兩種不同膠原酶，巰基蛋白酶，clostripain，胰蛋白酶樣酶和氨基肽酶的多種同工型。這種膠原蛋白和蛋白水解活性的組合對(duì)于分解細(xì)胞間基質(zhì)是組織解離的重要部分是有效的。復(fù)合物的一個(gè)組分是水解酶，其在Pro-Y-Gly-Pro序列中Y-Gly鍵優(yōu)先降解天然膠原中的螺旋區(qū)，其中Yzui常見為中性氨基酸。這種裂解產(chǎn)生易于進(jìn)一步消化肽酶的產(chǎn)物。粗膠原酶被金屬螯合劑如半胱氨酸，EDTA或鄰菲咯啉而不是DFP抑制。它也被大血漿糖蛋白α2巨球蛋白抑制。酶活性需要Ca ²⁺。每個(gè)膠原酶的特定酶譜與獲得研究細(xì)胞的組織（或用于細(xì)胞的用途）相關(guān)聯(lián)，并且由于相關(guān)性，Worthington已經(jīng)建立了幾種類型的原膠原酶：類型1,2,3和4。

• 1型粗膠原酶具有膠原酶，酪蛋白酶，clostripain和胰蛋白酶活性的原始平衡。
• 2型含有較高的相對(duì)水平的蛋白酶活性，特別是clostripain。
• 3型含有zui低水平的次級(jí)蛋白酶。
• 4型設(shè)計(jì)為特別低的胰蛋白酶活性，以限制對(duì)膜蛋白和受體的損傷。
•純化膠原酶，代碼：CLSPA，含有極少的次要蛋白水解活性以及高膠原酶活性。

沃辛頓還提供0.22μm過(guò)濾的各種預(yù)制包裝形式的過(guò)濾制劑，用于直接重建和用于細(xì)胞分離和培養(yǎng)過(guò)程。酶類型與不同組織的有效性之間的相關(guān)性一直很好，但不*，部分原因是可變參數(shù)的使用。然而，大多數(shù)研究人員認(rèn)為粗膠原酶批次的組織分型是一項(xiàng)有價(jià)值的服務(wù)。Worthington酶手冊(cè)中可以找到Worthington膠原酶和污染物測(cè)定的詳細(xì)描述。此外，組織特異性參考和詳細(xì)的分離條件可以在“ Worthington組織分離指南”中找到。

膠原酶測(cè)定是Mandl的修飾，其中膠原酶與天然膠原蛋白孵育5小時(shí)，膠原分解的程度使用Moore和Stein JBC，176,367（1948）比色茚胺法測(cè)定。釋放的氨基酸表達(dá)為微摩爾亮氨酸/毫克膠原酶。

用途：粗膠原酶廣泛用于酶原初級(jí)細(xì)胞分離和組織解離過(guò)程。大多數(shù)研究人員使用粗膠原酶制劑，如1,2,3和4型或色譜純化的膠原酶（代碼：CLSPA）; 后者通常與二級(jí)酶如彈性蛋白酶，透明質(zhì)酸酶等組合。為了獲得*效果，必須將待分解的組織定制為蛋白水解活性的混合物。不同組織的類型和有效性之間的相關(guān)性已經(jīng)很好，但不，并且可能部分依賴于使用和目標(biāo)參數(shù)以及批次間變化。有關(guān)更多信息，請(qǐng)參閱膠原酶采樣程序信息。沃辛頓還出版了“ 組織解離指南”，其中提供了有關(guān)用于這些應(yīng)用的酶的更多信息，以及許多細(xì)胞和組織類型的具體參考。

單位定義：一個(gè)單位在37℃，pH 7.5的5小時(shí)內(nèi)從膠原中釋放一微摩爾的L-亮氨酸當(dāng)量

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