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proteintech KMI-2說(shuō)明書(shū)

更新時(shí)間:2019-09-17      點(diǎn)擊次數(shù):3111

 

 

proteintech KMI-2說(shuō)明書(shū)

Mouse 單克隆抗體亞型鑒定試劑盒說(shuō)明書(shū)

試劑盒組分

 

Catalog No.

KMI-2

KMI-5

酶標(biāo)板(Microplate) 預(yù)包被了針對(duì)小鼠 IgG1,IgG2a,IgG2b,

IgG2cIgG3,IgMkappa light chain,lambda light chain 的特異性抗體

2

5

封板膜(Plate Cover seals)

2

5

20×PBST

15 mL

20mL×2

100×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP (Goat Anti-Mouse IgM+IgG-HRP)

120 μL

300 μL

顯色液 (TMB Substrate) A

240 μL

600 μL

顯色液 (TMB Substrate) B

24 mL

30mL×2

終止液 (Stop Solution)

24 mL

30mL×2

 

儲(chǔ)存條件

該試劑盒在低溫下運(yùn)輸,收到后請(qǐng)置于 4°C 保存,保存時(shí)間 6 個(gè)月。

 

操作步驟

1. 材料準(zhǔn)備

4°C 中取出 Mouse 單克隆抗體亞型鑒定試劑盒,室溫條件下平衡 30 分鐘。

a. 1×PBST 10 mL 20×PBST + 190 mL 超純水

b. 酶標(biāo)板條 根據(jù)樣本數(shù)量選取酶標(biāo)板條數(shù)(測(cè)定 1 個(gè)樣本需要 1 酶標(biāo)板條),余下板條置于密袋中,4°C 保存。

c. 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP 10 μL 100×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP + 990 μL 1×PBST

2. 樣本準(zhǔn)備

a. 雜交瘤細(xì)胞上清 將樣本以 1×PBST 1:100 稀釋?zhuān)?/span> 10 μL 雜交瘤細(xì)胞上清 + 990 μL 1×PBST。推薦稀釋范圍為 1:20-1:200。

b. 腹水 將樣本以 1×PBST 1:100000 稀釋?zhuān)?/span> 1 μL 腹水 + 1 mL 1×PBST1:1000),再取上述混合液 5 μL + 495 μL 1×PBST。推薦稀釋范圍為 1:50000-1:200000。

c. 純化抗體 將樣本以 1×PBST 稀釋至 200 ng/mL,推薦稀釋濃度為 20 ng/mL-1 μg/mL。

3. 單克隆抗體亞型鑒定

a. 將待測(cè)樣本適當(dāng)稀釋加入板條樣品孔中,50 μL/孔。

a. 無(wú)需孵育,將 1×羊抗鼠 IgM+IgG-HRP 加入樣品孔中,50 μL/孔。混勻器上輕輕混勻,也可用手輕輕敲擊板架兩側(cè) 1 min。

b. 蓋上封板膜,室溫孵育 1 h。

c. 棄去孔內(nèi)液體,1×PBST 洗板 3 次,吸水紙上拍干。

d. 將現(xiàn)配的顯色液加入孔中,100 μL/孔。

注:顯色液配方,A 液:B =1:100,即 10μL A 液與 1 mL B 液混合,混勻后立即使用。

e. 室溫避光顯色 10-20 min。每孔加入終止液,100 μL/孔。

f. 


結(jié)果判讀。結(jié)果可以對(duì)照下圖以肉眼判定,也可以通過(guò)酶標(biāo)儀讀取
OD450。顏色深或是 OD 值高孔對(duì)應(yīng)的即為相應(yīng)亞型。注:每個(gè)樣本應(yīng)該在A-F 中有一個(gè)陽(yáng)性孔(即是樣本重鏈類(lèi)型),G H 中有一個(gè)陽(yáng)性孔(即是樣本輕鏈類(lèi)型)。

 

注意事項(xiàng)

1. 顯色液應(yīng)臨用前配制,即配即用。顯色液A 液應(yīng)避光保存。

2. 余下板條應(yīng)密封保存。如短期不用,可置于-20°C 保存。

 

常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

 

常見(jiàn)問(wèn)題

可能原因

解決方案

多種重鏈結(jié)果

腹水中有雜抗體

將腹水樣本至少 1:100000 稀釋

樣本中抗體濃度過(guò)高

再將樣本 1:2-1:10 稀釋

雜交瘤細(xì)胞中含有多種細(xì)胞系

亞克隆雜交瘤細(xì)胞

顯色較慢或顏色較弱

樣本中抗體濃度低

減少稀釋倍數(shù);延長(zhǎng)顯色時(shí)間

結(jié)果難以判定

多種重鏈或輕鏈結(jié)果

再將樣本 1:4 1:8 稀釋后重新檢測(cè)

 

 

 

 

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