expedeon 362-0030說(shuō)明書(shū)

Lightning-Link® Rapid FluoProbes647H

快速FluoProbes647H抗體和蛋白質(zhì)標(biāo)記試劑盒

所述Expedeon閃電鏈路®快速FluoProbes647H抗體標(biāo)記試劑盒使抗體，蛋白質(zhì)和肽，或任何其他生物分子與可用的胺基團(tuán)的直接結(jié)合，與100％材料恢復(fù)FluoProbes647H。該試劑盒僅需30秒的動(dòng)手時(shí)間，偶聯(lián)物即可在20分鐘內(nèi)使用。該技術(shù)可從10ug擴(kuò)展到1g甚至更大，并經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制測(cè)試，以確保始終如一的高質(zhì)量和出色的批次間可重復(fù)性。

FluoProbes ® 647H是新一代的設(shè)計(jì)，標(biāo)簽生物分子熒光標(biāo)記物之一。它在650nm處具有強(qiáng)吸收，在684nm處具有高熒光（消光系數(shù)2.5 x10 5 cm -1 M -1），并且量子產(chǎn)率高。

流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)–快速FluoProbes647H

使用Expedeon RapidLightning-Link®試劑盒將小鼠抗人CD8與FluoProbes647H偶聯(lián)。然后使用結(jié)合的抗體對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞染色，然后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。（藍(lán)線(xiàn)–陰性對(duì)照；紅線(xiàn)–陽(yáng)性染色）。

如何輕松地偶聯(lián)抗體

1.我應(yīng)該使用哪個(gè)標(biāo)簽？

抗體標(biāo)記的選擇主要取決于應(yīng)用程序：

請(qǐng)參閱此處的表格  ，  了解Lightning-Link®熒光染料，蛋白質(zhì)和tandems的吸收/發(fā)射波長(zhǎng)。

2.Lightning-Link®和Lightning-Link®Rapid有什么區(qū)別？

我們的標(biāo)準(zhǔn)和快速  Lightning-Link® 試劑盒均可在整個(gè)過(guò)程中，通常在20到30秒的動(dòng)手時(shí)間內(nèi)生成結(jié)合物。但是，Lightning-Link®Rapid試劑盒的綴合和淬滅孵育時(shí)間較短，可以更快地生成綴合物。抗體的考慮與終偶聯(lián)物的高質(zhì)量*相同。

3.我可以使用Lightning-Link®標(biāo)簽什么？

Lightning-Link®技術(shù)的工作原理是將目標(biāo)上的游離胺基作為目標(biāo)。它可用于標(biāo)記抗體，肽，蛋白質(zhì)和任何其他具有游離胺基的分子。

有關(guān)標(biāo)記抗體以外的分子的建議，請(qǐng)  聯(lián)系我們的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)。

4.我的抗體需要多少純度？

您的抗體必須純化，因?yàn)槠渌麕в杏坞x胺基的分子會(huì)干擾反應(yīng)，導(dǎo)致偶聯(lián)物質(zhì)量較差。

應(yīng)該選擇合適的純化方法：

• 親和純化  –這是優(yōu)選方法，因?yàn)樗偸菚?huì)產(chǎn)生僅包含目標(biāo)抗體的純化樣品。
• 血清蛋白A或G的純化  –這將產(chǎn)生血清中所有IgG的純化樣品。您將獲得純化的IgG餾分，但是該餾分中只有一小部分是目標(biāo)IgG。盡管需要調(diào)整偶聯(lián)物的稀釋度，但該IgG餾分仍會(huì)用我們的試劑盒標(biāo)記。
• 組織培養(yǎng)上清液或腹水的蛋白A或G純化  –這種方法將產(chǎn)生與親和純化等效的純化抗體。

其他純化方法，例如離子交換色譜法和硫酸銨沉淀法，是低質(zhì)量的純化方法，應(yīng)避免使用。使用0.2 / 0.22 µm過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾是一種滅菌而不是純化的方法，因此不適用。

5.我的抗體是否在合適的緩沖液中？

有關(guān)建議的緩沖條件，請(qǐng)參見(jiàn)下表：

1  請(qǐng)注意，單獨(dú)顯示的濃度不應(yīng)影響反應(yīng)。但是，與不建議超過(guò)一定濃度的其他化合物結(jié)合使用，可能會(huì)影響反應(yīng)。

2  如果打算將此試劑盒用于免疫組織化學(xué)，建議不要使用明膠或BSA。

6.如果我的抗體制劑不符合要求怎么辦？

如果您的抗體需要純化或緩沖液與我們的試劑盒不兼容，我們開(kāi)發(fā)了  AbSelect™純化試劑盒系列  ，可讓您快速簡(jiǎn)單地純化抗體，并且與Lightning-Link®試劑盒*兼容。

所使用的試劑盒取決于您的特定樣品（種類(lèi)，緩沖液，污染物，體積等）。我們?cè)O(shè)計(jì)了一個(gè)方便的流程圖來(lái)幫助您選擇工具包（在此處查看），但是 如果您需要進(jìn)一步的指導(dǎo)，請(qǐng)查閱各個(gè)試劑盒規(guī)程，以查看適用于每個(gè)試劑盒的抗體量/量。

如果您的抗體已經(jīng)純化，但濃度明顯低于1mg / ml，則可以使用我們的  抗體濃縮和清潔試劑盒進(jìn)行濃縮。該試劑盒還可通過(guò)與試劑盒提供的緩沖液進(jìn)行緩沖液交換來(lái)去除低分子量污染物，如疊氮化物，三羥甲基氨基甲烷或甘氨酸，該試劑盒與Lightning-Link®*兼容。

如果您的抗體包含BSA，則現(xiàn)在可以 通過(guò)幾個(gè)簡(jiǎn)單的步驟使用我們的  BSA去除試劑盒來(lái)純化抗體。請(qǐng)注意，該試劑盒還可使您濃縮抗體。

注意：所有AbSelect試劑盒只能與抗體一起使用。他們不會(huì)純化其他分子。僅有的例外是濃縮和清除試劑盒（861-0010），該試劑盒可與大于10kD的其他分子一起使用。

7.是否需要清洗或脫鹽步驟？

與傳統(tǒng)的標(biāo)記方法相比，Lightning-Link®技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)之一是不需要結(jié)合物純化。Lightning-Link®反應(yīng)非常高效，并且試劑盒已經(jīng)過(guò)優(yōu)化，因此，只要遵循操作規(guī)程，偶聯(lián)結(jié)束時(shí)只剩下很少量的游離標(biāo)簽。試劑盒中提供的Quencher會(huì)將該剩余的游離標(biāo)簽帶有其反應(yīng)性“Lightning-Link®”基團(tuán)，并在應(yīng)用程序的洗滌步驟中將其洗去。

8.我的新共軛將穩(wěn)定嗎？

將Lightning-Link®混合物與抗體溶液溶解后，混合物中的專(zhuān)有化學(xué)物質(zhì)將被激活。這導(dǎo)致抗體在接近中性的pH值下以柔和受控的方式與標(biāo)記定向共價(jià)鍵合。綴合物的穩(wěn)定性取決于您的抗體和選擇的標(biāo)記。

大多數(shù)Lightning-Link®共軛物可在4°C下未稀釋的情況下多保存18個(gè)月。例外的是串聯(lián)共軛物，其多可穩(wěn)定3個(gè)月。