脂質(zhì)過(guò)氧化傳感器C11-BODIPY 581/591說(shuō)明書(shū)

上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時(shí)，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國(guó)產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來(lái)讓每一個(gè)和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國(guó)生物制造企業(yè)，圓夢(mèng)中國(guó)。
產(chǎn)品詳情

產(chǎn)品描述

一、 化學(xué)結(jié)構(gòu)：

二、 檢測(cè)原理：

C11-BODIPY 581/591 是一種新型的對(duì) Lipid ROS 高選擇性、高靈敏的脂質(zhì)過(guò)氧化傳感器，與其他 ROS 捕獲探針不同之處在于，C11-BODIPY 581/591 具有好的親脂性可以快速入膜，隨后可以選擇性的對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞膜中的脂質(zhì)過(guò)氧化(Lipid ROS)進(jìn)行捕獲，并在氧化后仍保持親脂性，不會(huì)離開(kāi)脂質(zhì)膜，該過(guò)程同時(shí)伴隨熒光信號(hào)變化。多用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞分析等對(duì) Lipid ROS 的可視化監(jiān)測(cè)。C11-BODIPY 581/591 結(jié)構(gòu)中多不飽和丁間二烯基在 Lipid ROS 催化氧化后，其熒光發(fā)射峰從 590 nm偏移至 510 nm。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品溶解：

商品開(kāi)封后，離心機(jī)輕甩；隨后加入適量 DMSO 進(jìn)行溶解，溶解度至少可達(dá) 25mg/mL。溶解后建議分裝-20℃避光保存，盡量避免反復(fù)凍融，防止吸潮。

【注】：樣品輕甩目的是為了避免痕量的探針吸附管壁損失樣本。

2. 樣品使用：

1) 流式細(xì)胞分析：

懸浮細(xì)胞：800 g 離心 5 min 收集細(xì)胞沉淀；隨后 PBS 洗滌細(xì)胞兩遍。貼壁細(xì)胞：棄培養(yǎng)液，用常溫 PBS 或培養(yǎng)液輕洗細(xì)胞 2 次，隨后胰酶消化，800g 離心 5 min 收集細(xì)胞沉淀，隨后 PBS 洗滌細(xì)胞兩遍，每個(gè)樣本收集 1~5 ×105 個(gè)細(xì)胞。(注意：操作過(guò)程中輕柔吹打細(xì)胞， 消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，劇烈吹打或胰酶消化過(guò)度會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果)

C11-BODIPY 581/591 用于脂質(zhì)過(guò)氧化檢測(cè)的推薦濃度為終濃度 5μM；配制方法：用新鮮空白培養(yǎng)液配制終濃度為 5μM 的C11-BODIPY 581/591 染色液待用，DMSO 含量≤5‰。(注意：該步操作建議在消化細(xì)胞前準(zhǔn)備好，以免細(xì)胞消化后久置影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果)

將事先配置好的脂質(zhì)過(guò)氧化染色液加入收集的細(xì)胞沉淀中，推薦體積為 500μL，隨后置于 37℃孵箱， 染色 30min，期間 5-10min 間隔輕彈細(xì)胞使其懸浮保證染色更充分。

染色結(jié)束后，800 g 離心 5 min，棄上清，隨后用PBS 清洗細(xì)胞 2 次，加入 200μLPBS 重懸細(xì)胞用于流式分析。

2） 原位成像：

接種適當(dāng)密度的細(xì)胞于 20mm 規(guī)格的蓋玻片上（也可用共聚焦小皿替代），給予實(shí)驗(yàn)藥物處理適當(dāng)時(shí)間后，吸去培養(yǎng)液，用 PBS 洗滌細(xì)胞一遍加入 500 μL 配制好的脂質(zhì)過(guò)氧化染色液，于 37℃染色 30min；（配制方法參考流式分析中的染色液配制）棄培養(yǎng)液，PBS 洗滌細(xì)胞兩遍后熒光顯微鏡或激光共聚焦下進(jìn)行成像檢測(cè)。細(xì)胞在染色后應(yīng)在 1 h 之內(nèi)完成檢測(cè)。

3）檢測(cè)條件：

該分子探針在還原狀態(tài)下最佳激發(fā)波長(zhǎng)為 581 nm, 發(fā)射為 591nm；被 Lipid ROS 氧化后最佳激發(fā)波長(zhǎng)為 500 nm，發(fā)射在 510nm。因此，在流式分析中檢測(cè)通道為 FL1-A；激光共聚焦檢測(cè)：氧化態(tài)激發(fā)波長(zhǎng)可選488nmFITC）通道；還原態(tài)激發(fā)波長(zhǎng)可選 561 nm（TRITC）通道。

實(shí)驗(yàn)案例分析

流式分析實(shí)驗(yàn)范例：

使用本試劑檢測(cè) 10 μM RSL3（鐵死亡經(jīng)典誘導(dǎo)劑）處理 A549 細(xì)胞 24 h 后的細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化水平的流式檢測(cè)

原位成像實(shí)驗(yàn)范例：

下圖為 RSL3（10 μM）處理A549 細(xì)胞 24 h 后，使用本試劑（5μM）對(duì)活細(xì)胞中脂質(zhì)過(guò)氧化水平進(jìn)行原位染色后激光共聚焦成像結(jié)果。

注意事項(xiàng)

1. 此試劑盒僅供科研使用。

2. 使用前小心離心數(shù)秒取用，需佩戴手套操作，注意避免與皮膚、眼睛和黏膜接觸。

3. 本試劑盒可用檢測(cè)活細(xì)胞中 Lipid ROS 水平，用于評(píng)價(jià)細(xì)胞鐵死亡狀態(tài)。